方法

（一）萃取溶媒開發

1. 秤取9份，各0.5 g之市售穀精草粉末(經60 mesh過篩)，分別放入20 mL 樣品瓶。
2. 分別加入10 mL 的95% EtOH, 80% EtOH, 50% EtOH, 25% EtOH 及H₂O，超音波(40 kHz)震盪30 min。
3. 使用1號濾紙過濾後將濾液減壓濃縮乾燥。
4. 加入1 mL 80% MeOH回溶樣品，經0.45 mm nylon濾膜過濾後取濾液進行HPLC分析。

（二）萃取次數考察

1. 取穀精草粉末約0.5 g置20 mL樣品瓶中，加入80%乙醇20 mL，超音波震盪30 min。
2. 使用1號濾紙過濾後，濾液再經0.45 mm nylon濾膜過濾後，取濾液進行HPLC分析。
3. 殘渣部分重複上述方法多次萃取、直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。

（三）對照標準品溶液

取標準品1精確秤定2.51 mg，加1 mL 的80%甲醇混合均勻，製成每1 mL含2510 mg的標準品儲備溶液。

（四）檢品溶液

1. 秤取0.5 g穀精草粉末放入20 mL樣品瓶中，加入20 mL 80% EtOH，超音波震盪30 min。
2. 以1號濾紙過濾後將濾液收集於50 mL濃縮瓶中，殘渣再加入20 mL 80% EtOH，超音波震盪30 min。
3. 以1號濾紙過濾後將濾液收集於同一個50 mL濃縮瓶中減壓濃縮乾燥。
4. 加10 mL 80% MeOH到濃縮瓶中回溶萃取物，使用0.45 mm nylon濾膜過濾後取濾液進行HPLC分析。

（五）測定法

    分別精確吸取標準品溶液、檢品溶液20 mL進行 HPLC分析後，經檢量線計算溶液中高車前素7-O-葡萄糖苷(hispidulin7-O-b-D-glucopyranoside)(1)含量，即得。

（六）檢量線

    取標準品1的儲備溶液，用80% MeOH連續稀釋成為每1 mL各別含10, 50, 251, 502, 1004 μg等不同濃度的標準品。以上溶液各取20 mL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R²。

（七）精密度試驗

    以濃度為502 mg/mL之標準品1稀釋液連續進樣3針，求出其波峰面積之相對標準差

（八）再現性與穩定性試驗

1.    再現性：取同一家市售穀精草粉末，依檢品溶液製備方法平行製備3份檢品溶液並進樣分析，以標準品1含量為指標，求出相對標準差

2.    穩定性：取同一家市售穀精草粉末0.5 g，依檢品溶液製備方法製備檢品溶液，分別於0、8和24小時取樣進行HPLC分析，以標準品1的波峰面積為指標求出相對標準差

（九）偵測極限與定量極限試驗

    偵測極限(limit of detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧ 3:1時之濃度，作為偵測極限估計值；定量極限(limit of quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。

（十）同日間與異日間試驗

取濃度分別為50, 502, 1004 mg/mL之標準品1稀釋液進行同日間測試(在8小時內每個濃度分析三次)與異日間測試(24小時內分析三次)，求其相對標準偏差值。

（十一）添加回收率試驗

    取穀精草粉末約0.5 g三份，置20 mL樣品瓶中，精確加入三種不同濃度已溶解完全之標準品1溶液，隨後依檢品溶液製備方式製備出三份不同添加量之檢品溶液進行HPLC分析。