(Ruiren, Prinsepia uniflora)
（一）萃取溶媒開發
取本品粉末七份，每份精確稱定1.0 g，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇、水各12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No. 1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，加入溶媒至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取濾液，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得每克重量之最大峰面積為最佳蕤仁萃取溶媒。
（二）萃取次數考察
取本品粉末約1.0 g，精確秤定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入50%乙醇12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No. 1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，加50%乙醇至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取濾液，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成份被萃取完全，並選出最佳萃取次數。
（三）對照標準品溶液
取標準品原兒茶酸(protocatechuic acid)精確稱定1.0 mg，加1 mL的50%乙醇製成每1 mL含原兒茶酸(protocatechuic acid) 1000 μg的標準品儲備溶液。
（四）檢品溶液
取本品粉末約1.0 g，精確秤定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入50%乙醇12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No.1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，殘渣部分重複提取一次，合併濾液，加50%乙醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取濾液，即得。
（五）測定法
分別精確吸取標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中原兒茶酸(protocatechuic acid)的含量，即得。
（六）檢量線
精確吸取原兒茶酸(protocatechuic acid)標準品儲備溶液適量(1000 μg/mL)，以50%乙醇稀釋製成含原兒茶酸(protocatechuic acid)分別為3 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL及200 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波鋒面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2。
（七）精密度試驗
以原兒茶酸(protocatechuic acid)濃度為50 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以原兒茶酸(protocatechuic acid)波鋒面積為指標，求出相對標準差。
（八）再現性與穩定性試驗
1. 再現性:取同一家市售蕤仁粉末，依蕤仁檢品溶液製備方法平行製備五份蕤仁檢品溶液，進樣測定，以原兒茶酸(protocatechuic acid)含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性:取同一家市售蕤仁粉末，依蕤仁檢品溶液製備方法製備蕤仁檢品溶液，分別在0、4、8、16、24小時進樣測定，以原兒茶酸(protocatechuic acid)鋒面積為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≥ 3:1時之濃度，作為偵測極限估計值；定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≥ 10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）同日間與異日間試驗
取5、50、100 μg/mL之原兒茶酸(protocatechuic acid)標準品溶液進行同日間測試(在24小時內每個濃度注射三次)與異日間測試(七天內注射三次，每次間隔24小時以上，每個濃度重複注射三次)，求其相對標準差(R.S.D.，%)，以評估HPLC分析條件之穩定性與再現性。
（十一）添加回收率試驗
取已知原兒茶酸(protocatechuic acid)含量的蕤仁藥材粉末約0.5 g，精確稱定五份，分別加入100 μg的原兒茶酸(protocatechuic acid)，並按檢品溶液製備方法操作測定。 |
