方法
(一)對照標準品溶液
取標準品蒙花苷(Linarin)精確秤定1.35 mg,加70%乙醇水溶液,定體積至100 mL,製成每1 mL含13.5 μg蒙花苷(Linarin)。取標準品柳穿魚葉苷(Pectolinarin)精確秤定5.5 mg,加70%乙醇水溶液,定體積至100 mL,製成每1 mL含55 μg柳穿魚葉苷(Pectolinarin)。
(二)檢品溶液
取本品粉末約0.5 g,精確秤定,加入70%乙醇水溶液10 mL,置濃縮瓶中,連接迴流冷凝裝置,置水鍋上迴流萃取60分鐘,冷卻後,以125 mm No.1濾紙過濾,定容至10 mL,搖勻再過濾(Syringe filter, 0.22 μm),即得。
(三)測定法
分別精確吸取標準品溶液與檢品溶液10 μL,注入HPLC測定,用標準曲線計算溶液中蒙花苷(Linarin)、柳穿魚葉苷(Pectolinarin)的含量,即得。
(四)檢量線
精確吸取蒙花苷(Linarin)標準品儲備液適量 (13.5 μg/mL),以70%乙醇水溶液稀釋成含蒙花苷(Linarin)分別為6.75 μg/mL、2.70 μg/mL、1.35 μg/mL、0.675 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 mL分別注入HPLC進行定量分析,利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸,並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2。
精確吸取柳穿魚葉苷(Pectolinarin)標準品儲備液適量 (55 μg/mL),以70%乙醇水溶液稀釋成含柳穿魚葉苷(Pectolinarin)分別為27.5 μg/mL、11.0 μg/mL、5.50 μg/mL、2.75 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 mL分別注入HPLC進行定量分析,利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸,並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2。
(五)精密度試驗
以蒙花苷(Linarin)濃度為6.75 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針,以蒙花苷(Linarin)波峰面積為指標,求出相對標準差。
以柳穿魚葉苷(Pectolinarin)濃度為11.0 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針,以柳穿魚葉苷(Pectolinarin)波峰面積為指標,求出相對標準差。
(六)再現性與穩定性試驗
1. 再現性:取同一家市售大薊粉末,依大薊檢品溶液製備方法平行製備 五份大薊檢品溶液,進樣測定,以蒙花苷(Linarin)、柳穿魚葉苷(Pectolinarin)的含量(%)為指標,求出相對標準差。
2. 穩定性:取同一家市售大薊粉末,依大薊檢品溶液製備方法製備大薊檢品溶液,分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定,以蒙花苷(Linarin)、柳穿魚葉苷(Pectolinarin)的含量為指標,求出相對標準差。
(七)偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(Limit of Detection, LOD): 將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並以訊號雜訊比為≧ 3:1時之濃度,作為偵測極限估計值。定量極限(Limit of Quantitation, LOQ): 將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並以訊號雜訊比為≧ 10/1時之濃度,作為定量極限估計值。
(八)添加回收率試驗
取已知蒙花苷(Linarin)含量的大薊藥材粉末0.5 g,精確秤定三份,分別加入0.2 mg、0.4 mg、0.6 mg的蒙花苷(Linarin),並按檢品溶液製備方法製備,每次取10 μL注入。
取已知柳穿魚葉苷(Pectolinarin)含量的大薊藥材粉末0.5 g,精確秤定三份,分別加入0.4 mg、0.6 mg、0.9 mg的柳穿魚葉苷(Pectolinarin),並按檢品溶液製備方法製備,每次取10 μL注入。 |