（一）萃取溶媒開發

    取本品粉末4份，每份精確稱定1.0 g，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、25%甲醇各25 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，放冷再稱定重量，用溶媒補足減少的重量，搖勻並以No. 1濾紙過濾，取得濾液，再過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得每克重量之最大波峰面積為最佳敗醬萃取溶媒。

（二）萃取次數考察

    取本品粉末約1.0 g，精確稱定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入50%甲醇25 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，放冷再秤定重量，用50%甲醇補足減少的重量，搖勻並以No. 1濾紙過濾再過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取濾液，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，並選出最佳萃取次數。

（三）對照標準品溶液

    取標準品綠原酸(Chlorogenic acid)精確稱定1.0 mg，加1 mL的甲醇製成每1 mL含綠原酸(Chlorogenic acid) 1000 μg的標準品儲備溶液。

（四）檢品溶液

    取本品粉末約1.0 g，精確秤定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入50%甲醇25 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No.1濾紙過濾至50 mL之定量瓶中，殘渣部分重複提取一次，合併濾液，加50%甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取濾液，即得。

（五）測定法

    分別精確吸取標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中綠原酸(Chlorogenic acid)的含量，即得。

（六）檢量線

    精確吸取綠原酸(Chlorogenic acid)標準品儲備溶液適量(1000 mg/mL)，以甲醇稀釋製成含綠原酸(Chlorogenic acid)分別為375 μg/mL、250 μg/mL、125 μg/mL、50.0 μg/mL、25.0 μg/mL、10.0 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 mL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R²。

（七）精密度試驗

    以綠原酸(Chlorogenic acid)濃度為50 μg/mL之標準品儲備液分別連續進樣五針，以綠原酸(Chlorogenic acid)的波峰面積為指標，求出相對標準差。

（八）再現性與穩定性試驗

1. 再現性：取同一家市售敗醬粉末，依敗醬檢品溶液製備方法平行製備五份敗醬檢品溶液，進樣測定，以綠原酸(Chlorogenic acid)的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一家市售敗醬粉末，依敗醬檢品溶液製備方法製備敗醬檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以綠原酸(Chlorogenic acid)的波峰面積為指標，求出相對標準差。

（九）偵測極限與定量極限試驗

    偵測極限(limit of detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧ 3:1時之濃度，作為偵測極限估計值；定量極限(limit of quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。

（十）添加回收率試驗

取已知綠原酸(Chlorogenic acid)含量的敗醬藥材粉末0.5 g，精確稱定三份，分別加入約0.5、1.0、2.0 mg的綠原酸(Chlorogenic acid)，並按檢品溶液製備方法操作測定，每次取10 μL注入液相層析儀，每個檢測品進行三重複。