(Stephaniae tetrandrae Radix)
方法
（一）萃取溶媒開發
取本品粉末七份，每份精確稱定0.5 g，置50 mL三角錐形瓶中，精密加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇、水各12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以125 mm濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，殘渣部分重複提取一次，合併濾液，加入溶媒至刻度,搖勻，過濾(Syringe filter，0.22 μm)，取濾液，即得。每次取5 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得每克重量之最大峰面積為最佳防己萃取溶媒。
（二）萃取次數考察
取本品粉末約0.5 g，精確秤定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入75%乙醇12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻，過濾 (Syringe filter, 0.22 μm)，取濾液，即得。每次取5 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成份被萃取完全，並選出最佳萃取次數。
（三）對照標準品溶液
精確秤取Fangchinoline 5 mg，加10 mL 的100%甲醇製成每 1 mL含0.5 mg (Fangchinoline)的標準品儲備溶液。
（四）檢品溶液
取本品粉末約0.5 g，精確秤定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入75%乙醇12.5 mL超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以125 mm濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，殘渣部分重複提取一次，合併濾液，加75%乙醇至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter，0.22 μm)，取續濾液，即得。
（五）測定法
分別精確吸取標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中防己諾林鹼 (Fangchinoline) 的含量，即得。
（六）檢量線
精確吸取防己諾林鹼(Fangchinoline)標準品儲備液適量(500 μg/mL)，以100%甲醇稀釋成含防己諾林鹼 (Fangchinoline) 分別為100 μg/mL、50 μg/mL、25 μg/mL、10 μg/mL、5 μg/mL、2.5 μg/mL的標準品溶液。上述溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析。利用標準品之波峰峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b 與相關係數R2。
（七）精密度試驗
以防己諾林鹼 (Fangchinoline) 濃度為2.5 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以防己諾林鹼 (Fangchinoline) 波鋒面積為指標，求出相對標準差。
（八）再現性與穩定性試驗
1.再現性：取同一家市售防己粉末，依防己檢品溶液製備方法平行製備五份防己檢品溶液，進樣測定，以防己諾林鹼 (Fangchinoline)含量 (%)為指標，求出相對標準差。
2.穩定性：取同一家市售防己粉末，精確稱取約0.5 g，依防己檢品溶液製備方法製備防己檢品溶液，分別再0、8、24 小時進樣測定，以防己諾林鹼 (Fangchinoline)峰面積為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≥ 3:1時之濃度，作為偵測極限估計值；定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≥ 10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）同日間與異日間試驗
取2.5、10、25 μg/mL之防己諾林鹼 (Fangchinoline)標準品溶液進行同日間測試(在24小時內每個濃度注射三次)與異日間測試(七天內注射三次，每次間隔24小時以上，每個濃度重複注射三次)，求其相對標準偏差值(%)以評估HPLC分析條件之穩定性與再現性。
（十一）添加回收率試驗
取本品粉末約0.5 g，精確秤定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入75%乙醇12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz)30分鐘，以濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.22 μm)，取0.1 mL濾液分別加入濃度為25、50及100 μg/mL之標準品0.1 mL搖勻後，每次取5 μL注入HPLC，每個檢測品進行三重複。
|
