方法
（一）萃取溶媒開發
取本品粉末七份，每份精確稱定1.0 g，置100 mL濃縮瓶中，精確加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇、水各25 mL，連接迴流冷凝裝置，置加熱包迴流萃取60分鐘，冷卻後，以125 mm No.1 濾紙過濾，定容至25 mL，搖勻再過濾(syringe filter, 0.22 μm)，即得。每針 10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得每克重量之最大波峰面積為最佳白鮮皮萃取溶媒。
（二）萃取次數考察
取本品粉末約1.0 g，精確稱定，置100 mL濃縮瓶中，精確加入甲醇25 mL，連接迴流冷凝裝置，置加熱包迴流萃取60分鐘，冷卻後，以125 mm No.1 濾紙過濾，定容至25 mL，搖勻再過濾(syringe filter, 0.22 μm)，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取，進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。
（三）對照標準品溶液
取標準品白鮮鹼(Dictamnine)精確稱定0.6 mg，加甲醇至溶液體積10 mL，製成每1 mL含60 μg白鮮鹼。取標準品黃柏酮(Obacunone)精確稱定5 mg，加甲醇至溶液體積10 mL，製成每1 mL含500 μg黃柏酮。取標準品梣酮(Fraxinellone)精確稱定5 mg，加甲醇至溶液體積10 mL，製成每1 mL含500 μg梣酮(Fraxinellone)。
（四）檢品溶液
取本品粉末約1.0 g，精確稱定，加入25 mL甲醇，置濃縮瓶中，連接迴流冷凝裝置，置水鍋上迴流萃取60分鐘，冷卻後，以125 mm No.1濾紙過濾，定容至25 mL，搖勻再過濾(syringe filter, 0.22 μm)，即得。
（五）測定法
分別精確吸取標準品溶液與檢品溶液10 μL，注入HPLC測定，用標準曲線計算溶液中白鮮鹼(Dictamnine)、黃柏酮(Obacunone)、梣酮(Fraxinellone)的含量，即得。
（六）檢量線
精確吸取白鮮鹼(Dictamnine)標準品儲備液適量(60 μg/mL)，以甲醇稀釋成含白鮮鹼(Dictamnine)分別為30、15、5.0和1.0 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 mL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2。
精確吸取黃柏酮(Obacunone)標準品儲備液適量(500 μg/mL)，以甲醇稀釋成含黃柏酮(Obacunone)分別為250、125、100和60 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 mL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2。
精確吸取梣酮(Fraxinellone)標準品儲備液適量(500 μg/mL)，以甲醇稀釋成含梣酮(Fraxinellone)分別為250、125、60、30和15 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 mL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2。
（七）精密度試驗
以白鮮鹼(Dictamnine)濃度為15 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以白鮮鹼(Dictamnine)波峰面積為指標，求出相對標準差。
以黃柏酮(Obacunone)濃度為125 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以黃柏酮(Obacunone)波峰面積為指標，求出相對標準差。
以梣酮(Fraxinellone)濃度為125 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以梣酮(Fraxinellone)波峰面積為指標，求出相對標準差。
（八）再現性與穩定性試驗
1. 再現性：取同一批市售白鮮皮粉末，依白鮮皮檢品溶液製備方法平行製備五份白鮮皮檢品溶液，進樣測 定，以白鮮鹼(Dictamnine)、黃柏酮(Obacunone)、梣酮(Fraxinellone)的含量(%)為指標，求出相對標準 差。
2. 穩定性：取同一批市售白鮮皮粉末，依白鮮皮檢品溶液製備方法製備白鮮皮檢品溶液，分別在0、2、 4、8、16、24小時進樣測定，以白鮮鹼(Dictamnine)、黃柏酮(Obacunone)、梣酮(Fraxinellone)的含量 為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比≧3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比≧10/1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）添加回收率試驗
取已知白鮮鹼(Dictamnine)含量的白鮮皮藥材粉末1.0 g，精確稱定三份，分別加入0.1、0.5、1.0 mg的白鮮鹼，並按檢品溶液製備方法製備，每次取10 μL注入。
取已知黃柏酮(Obacunone)含量的白鮮皮藥材粉末0.2 g，精確稱定三份，分別加入1.0、1.5、2.0 mg的黃柏酮，並按檢品溶液製備方法製備，每次取10 μL注入。
取已知梣酮(Fraxinellone)含量的白鮮皮藥材粉末1.0 g，精確稱定三份，分別加入0.5、1.0、1.5 mg的梣 酮，並按檢品溶液製備方法製備，每次取10 μL注入。 |
