方法
(一)萃取次數考察
取本品粉末約1.0 g,精確稱定,置50 mL 三角錐形瓶中,精確加入95%乙醇25 mL,超音波震盪處理(功率300 W,頻率40 kHz) 30分鐘,以No.1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,過濾(Syring filter,0.45 μm),取濾液,即得。每針10 μL注入HPLC,殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣,直到指標成分被萃取完全,選出最佳萃取次數。
(二)溶劑配製
乙腈:水 (43:57至100:0)之混液。
(三)對照標準品溶液
取標準品桑根皮素(Morusin)精確稱定10.0 mg,加甲醇定體積至10 mL製成每1 mL含1.0 mg桑根皮素(Morusin)。
(四)檢品溶液
取本品粉末約1.0 g,精確稱定,置50 mL三角錐形瓶中,加入95%乙醇25 mL,超音波震盪處理(功率300 W,頻率40 kHz) 30分鐘,放置室溫,以No.1濾紙過濾。殘渣部分重複提取1次,合併濾液,轉移至100 mL濃縮瓶,減壓濃縮去除多量的乙醇,經微孔濾膜 (Syringe filter, 0.45 μm) 過濾至25 mL定量瓶,加95%乙醇定容至刻度,即得。
(五)測定法
分別精確吸取標準品溶液與檢品溶液10 μL,注入液相層析儀,測定,用標準曲線計算溶液桑根皮素(Morusin)的含量,即得。
(六)檢量線
精確吸取桑根皮素(Morusin)標準品儲備溶液(1.0 mg/mL)各0.1、0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mL,以甲醇溶液定體積至10 mL配製成桑根皮素(Morusin)分別為10.0 、25.0 、50.0、100、250、500、1000 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入液相層析儀進行定量分析,利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度 (x軸)進行線性回歸,並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2。
(七)精密度試驗
以桑根皮素(Morusin)濃度為1000 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針,以桑根皮素(Morusin)波峰面積為指標,求出相對標準差。
(八)再現性與穩定性試驗
1. 再現性:取同一批市售桑白皮粉末,依桑白皮檢品溶液製備方法平行製備五份桑白皮檢品溶液,進樣測定,以桑根皮素(Morusin)的含量(%)為指標,求出相對標準差。
2. 穩定性:取同一批市售桑白皮粉末,依桑白皮檢品溶液製備方法製備桑白皮檢品溶液,分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定,以桑根皮素(Morusin)的含量為指標,求出相對標準差。
(九)偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(Limit of Detection, LOD):將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並以訊號雜訊比為≧3:1時之濃 度,作為偵測極限估計值。定量極限Limit of Quantitation, LOQ):將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並 以訊號雜訊比為≧ 10:1時之濃度,作為定量極限估計值。
(十)添加回收率試驗
取本品粉末約1.0 g,精確稱定五份,分別加入1 mL的桑根皮素(Morusin)標準品(0.086 mg/mL),並按檢品 溶液製備方法製備,每次取10 μL注入液相層析儀,每個檢測品進行三重複。 |