中醫藥品質分析(qaTCM)
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菥蓂
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菥蓂

 (Thlaspi arvense)

方法

(一)萃取溶媒開發

取本品粉末七份,每份精確稱定1.0 g,置50 mL三角錐形瓶中,精確加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇、水各12.5 mL,超音波震盪處理(功率200 W,頻率40 kHz) 30分鐘,以No. 2濾紙過濾至25 mL之定量瓶中,加入溶媒至刻度,搖勻,過濾(Syringe filter, 0.45 mm),取濾液,即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC),以所測得每克重量之最大峰面積為最佳菥蓂萃取溶媒。

(二)萃取次數考察

取本品粉末約1.0 g,精確秤定,置50 mL三角錐形瓶中,精確加入50%乙醇12.5 mL,超音波震盪處理(功率200 W,頻率40 kHz) 30分鐘,以No. 2濾紙過濾至25 mL之定量瓶中,加50%乙醇至刻度,搖勻,過濾(Syringe filter, 0.45 μm),取濾液,即得。每針10 mL注入HPLC,殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣,並選出最佳萃取次數。

(三)對照標準品溶液

取標準品異牡荊黃素(Isovitexin)精確稱定1.0 mg,加1 mL的50%乙醇製成每1 mL含異牡荊黃素(Isovitexin) 1000 μg的標準品儲備溶液。

(四)檢品溶液

取本品粉末約1.0 g,精確秤定,置50 mL三角錐形瓶中,精確加入50%乙醇12.5 mL,超音波震盪處理(功率200 W,頻率40 kHz) 30分鐘,以No. 2濾紙過濾至25 mL之定量瓶中,殘渣部分重複提取一次,合併濾液,加50%乙醇至刻度,搖勻再過濾(Syringe filter, 0.45 μm),取濾液,即得。

(五)測定法

分別精確吸取標準品溶液、檢品溶液10 μL,注入HPLC,測定,用標準曲線計算溶液中異牡荊黃素(Isovitexin)的含量,即得。

(六)檢量線

精確吸取異牡荊黃素(Isovitexin)標準品儲備溶液適量(1000 μg/mL),以50%乙醇稀釋製成含異牡荊黃素(Isovitexin)分別為500 μg/mL 、250 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL、10 μg/mL、5 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析,利用標準品之波鋒面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸,並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2

(七)精密度試驗

以異牡荊黃素(Isovitexin)濃度為100 mg/mL之標準品溶液連續進樣五針,以異牡荊黃素(Isovitexin)波鋒面積為指標,求出相對標準差。

(八)再現性與穩定性試驗

1. 再現性:取同一家市售菥蓂粉末,依菥蓂檢品溶液製備方法平行製備五份菥蓂檢品溶液,進樣測定,以異牡荊黃素(Isovitexin)含量(%)為指標,求出相對標準差。

2. 穩定性:取同一家市售菥蓂粉末,依菥蓂檢品溶液製備方法製備菥蓂檢品溶液,分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定,以異牡荊黃素(Isovitexin)鋒面積為指標,求出相對標準差。

(九)偵測極限與定量極限試驗

偵測極限(limit of detection, LOD):將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並以訊號雜訊比為≥ 3:1時之濃度,作為偵測極限估計值;定量極限(limit of quantitation, LOQ):將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並以訊號雜訊比為≥ 10:1時之濃度,作為定量極限估計值。

(十)同日間與異日間試驗

取200、100、50 mg/ mL之異牡荊黃素(Isovitexin)標準品溶液進行同日間測試(在24小時內每個濃度注射三次)與異日間測試(七天內注射三次,每次間隔24小時以上,每個濃度重複注射三次),求其相對標準差(R.S.D.,%),以評估HPLC分析條件之穩定性與再現性。

(十一)添加回收率試驗

取已知異牡荊黃素(Isovitexin)含量的菥蓂藥材粉末約0.5 g,精確稱定五份,分別加入1.0 mg的異牡荊黃素(Isovitexin),並按檢品溶液製備方法操作測定。