(Dysosma versipellis (Hance) M. Cheng)
方法
(一）萃取溶媒開發
取本品粉末七份，每份精確稱定1.0 g，置125 mL三角錐形瓶中，
精密加入甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇、50%乙醇、水各50mL，超音波震盪處理(功率200W，頻率40kHz) 30分鐘，以NO.1濾紙過濾至50 mL之定量瓶中，加入溶媒至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.45μm)，取濾液，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得每克重量之最大峰面積為最佳八角蓮萃取溶媒。
（二）萃取次數考察
取本品粉末約1.0 g，精確秤定，置125 mL三角錐形瓶中，精確加入50%乙醇50 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No.1濾紙過濾至50 mL之定量瓶中，加50%乙醇至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取濾液，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成份被萃取完全，並選出最佳萃取次數。
（三）對照標準品溶液
取標準品鬼臼毒素(Podophyllotoxin)精確秤定10.0 mg，加甲醇定體積至10 mL製成每1 mL含1.0 mg鬼臼毒素(Podophyllotoxin)
（四）檢品溶液
取本品粉末約1.0 g，精確秤定，置125 mL三角錐形瓶中，精確加入50%乙醇50 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No.1濾紙過濾至50 mL之定量瓶中，加50%乙醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，即得。
（五）測定法
分別精確吸取標準品溶液與檢品溶液10μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中鬼臼毒素(Podophyllotoxin)的含量，即得。
（六）檢量線
精確吸取鬼臼毒素(Podophyllotoxin)標準品儲備溶液各500, 1000, 2500, 5000, 10000 μL，以50%乙醇溶液定體積至10 mL配製成含鬼臼毒素(Podophyllotoxin)分別為50、250、1000 g/mL的標準品溶液。以上溶液各取10μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波鋒面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2。
（七）精密度試驗
以鬼臼毒素(Podophyllotoxin)濃度為1000 g/mL之標準品儲備液連續 進樣五針，以鬼臼毒素(Podophyllotoxin)波鋒面積為指標，求出相對標準差。
（八）再現性與穩定性試驗
1. 再現性:取同一家市售八角蓮粉末，依八角蓮檢品溶液製備方法平行製備五份八角蓮檢品溶液，進樣測定，以鬼臼毒素(Podophyllotoxin)的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性:取同一家市售八角蓮粉末，依八角蓮檢品溶液製備方法製備八角蓮檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以鬼臼毒素(Podophyllotoxin)的含量為指標，求出相對標準差。
（九）同日間與異日間試驗
取100、500 g/mL之鬼臼毒素(Podophyllotoxin)標準品溶液進行同日間測試(intra-day test；在24小時內每個濃度重複注射三次)與異日間測試(inter-day test；7天內注射三次，每次間隔24小時以上，每個濃度重複注射三次)，求其相對標準差(R.S.D.，%)以評估HPLC分析條件之穩定性及再現性。
（十）偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(Limit of Detection, LOD): 將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≥ 3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。定量極Limit of Quantitation, LOQ): 將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≥ 10/1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十一）添加回收率試驗
取本品粉末約1.0 g，精確秤定三份，分別加入5.0、10.0、20.0mg
的鬼臼毒素(Podophyllotoxin)，並按檢品溶液製備方法製備，每次取10 μL
注入HPLC，每個檢測品進行三重複。 |
