方法
（一）最佳萃取溶媒開發
取本品粉末六份，每份精確稱定1.0 g，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇各12.5 mL，超音波震盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，冷卻後以No.1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，加入溶媒至刻度，取得濾液搖勻再過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得每克重量之標準品諾卡酮(Nootkatone)最大峰面積為最佳益智萃取溶媒。
（二）最佳萃取次數評估
取本品粉末約1.0 g (過第20號篩網)，精確稱定，置50 mL 三角錐形瓶中，精確加入甲醇12.5 mL，超音波震盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，冷卻後以No.1濾紙過濾，濾液加甲醇定容至25 mL之定量瓶中，搖勻再過濾(Syring filter，0.45 μm)，取濾液，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。
（三）對照標準品溶液
取標準品諾卡酮(Nootkatone)精確稱定4.0 mg，加甲醇定體積至10 mL製成每1 mL含諾卡酮(Nootkatone) 400 mg的標準品儲備溶液，並以甲醇稀釋至100 μg/mL製成對照標準品溶液。
（四）檢品溶液
取本品粉末(過第20號篩網)約1.0 g，精確稱定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇12.5 mL，超音波震盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No.1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，殘渣部分重複提取1次，合併濾液，加甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, 0.45μm)，即得。
（五）測定法
分別精確吸取對照標準品溶液(100 μg/mL)、檢品溶液10 mL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中諾卡酮(Nootkatone)的含量，即得。
（六）檢量線
精確吸取適量諾卡酮(Nootkatone)標準品儲備溶液(400 mg/mL)，以甲醇稀釋製成含諾卡酮(Nootkatone)分別為400、200、100、40、20、10、4.0 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波鋒面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2。
（七）精確度試驗
以諾卡酮(Nootkatone)濃度為100 mg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以諾卡酮波峰面積為指標，求出相對標準差。
（八）再現性與穩定性試驗
1. 再現性：取同一批市售益智粉末，依益智檢品溶液製備方法平行製備五份益智檢品溶液，進樣測定，以諾卡酮(Nootkatone)的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一批市售益智粉末，依益智檢品溶液製備方法製備益智檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以諾卡酮(Nootkatone)峰面積為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。定量極限Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧ 10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）添加回收率試驗
取已知諾卡酮(Nootkatone)含量的益智材料粉末約0.50 g，精確稱定五份，分別加入1 mL的諾卡酮(Nootkatone)標準品(0.79 mg/mL)，並按檢品溶液製備方法製備，每次取10 μL注入液相層析儀，每個檢測品進行三重複。 |
