四、方法
（一）對照標準品溶液
取標準品穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)精確稱定1.0 mg，加1 ml的甲醇製成每1 ml含穗花杉雙黃酮(Amentoflavone) 1000 μg的標準品儲備溶液。
（二）檢品溶液
取本品粉末(過第60號篩網)約0.2 g，精確秤定，置100 ml圓形瓶中，精確加入甲醇50 ml並秤定重量，加熱回流5小時，放冷再秤定重量，用甲醇補足減少的重量，搖勻並以No. 2濾紙過濾，取得濾液，再過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，即得。
（三）測定法
分別精確吸取標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)的含量，即得。
（四）檢量線
精確吸取穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)標準品儲備溶液適量(1000 μg/ml)，以甲醇稀釋製成含穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)分別為500 μg/ml 、250 μg/ml、100 μg/ml、50 μg/ml、10 μg/ml的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2。
（五）精密度試驗
以穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)濃度為50 mg/ml之標準品儲備液連續進樣五針，以穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)波峰面積為指標，求出相對標準差。
（六）再現性與穩定性試驗
1. 再現性：取同一家市售卷柏粉末，依卷柏檢品溶液製備方法平行製備五份卷柏檢品溶液，進樣測定，以穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一家市售卷柏粉末，依卷柏檢品溶液製備方法製備卷柏檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)峰面積為指標，求出相對標準差。
（七）偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(limit of detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧ 3:1時之濃度，作為偵測極限估計值；定量極限(limit of quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（八）添加回收率試驗
取已知穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)含量的卷柏藥材粉末約0.1 g，精確稱定五份，分別加入約1.0 mg的穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)，並按檢品溶液製備方法操作測定。 |
