（一）萃取溶媒開發：

取本品粉末約0.5 g，九份，精確稱定，置50 mL三角錐形瓶中，精密加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、25%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇、25%乙醇、水各12.5 mL，超音波振盪處理(功率400 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以125 mm濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，殘渣部分重複提取一次，合併濾液，各加其萃取溶媒定容至25 mL，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取續濾液，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀，以所測得每單位重量之最大波峰面積為最佳天葵子萃取溶媒。

（二）萃取次數考察：

取本品粉末約0.5 g，精確稱定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇12.5 mL，超音波振盪處理(功率400 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以125 mm濾紙過濾至25 mL定量瓶中，加甲醇定容至25 mL，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取續濾液，即得。每針以10 μL注入高效能液相層析儀，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。

（三）對照標準品溶液：

取標準品格列風內酯(Griffonilide)適量，精密稱定，加甲醇製成每1 mL含格列風內酯(Griffonilide)180.0 μg的標準品儲備溶液。

（四）檢品溶液：

取本品粉末約0.5 g，精確稱定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇12.5 mL，超音波振盪處理(功率400 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以125 mm濾紙過濾至25 mL定量瓶中，殘渣部分重複提取一次，合併濾液，加甲醇定容至25 mL，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取續濾液，即得

（五）測定法：

分別精密吸取標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入液相層析儀，測定，用標準曲線計算檢品溶液中格列風內酯(Griffonilide)的含量，即得。

（六）檢量線製作：

精密吸取格列風內酯(Griffonilide)標準品儲備液適量(180.0 μg/mL)，以甲醇稀釋製成含格列風內酯(Griffonilide)分別為90 μg/mL、40 μg/mL、20 μg/mL、10 μg/mL、5 μg/mL、2 μg/mL、1 μg/mL、0.5 μg/mL的標準品溶液。

（七）精密度試驗：

以格列風內酯(Griffonilide)濃度為180.0 μg/mL之標準品溶液連續進樣五針，以格列風內酯(Griffonilide)波峰面積為指標，求出相對標準差。

（八）重複性與樣品穩定性試驗：

1. 重複性：取同一家市售天葵子粉末，依天葵子檢品溶液製備方法平行製備五份天葵子檢品溶液，進樣測定，以格列風內酯(Griffonilide)含量(%)為指標，求出相對標準差。

2. 樣品穩定性：取同一家市售天葵子粉末，精確稱取約0.5 g，依天葵子檢品溶液製備方法製備天葵子檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以格列風內酯(Griffonilide)波峰面積為指標，求出相對標準差。

（九）偵測極限與定量極限試驗：

1. 偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為3:1時之濃度，作為偵測極限之估計值。

2. 定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為10:1時之濃度，作為定量極限之估計值。

（十）添加回收率試驗：

取已知格列風內酯(Griffonilide)含量的天葵子藥材粉末約0.25 g，精密稱定五份，分別加入80 μg的格列風內酯(Griffonilide)，並按檢品溶液製備方法操作、測定。