（一）萃取溶媒開發

取本品粉末七份，每份精確稱定1.0 g，置125 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇、水各12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No. 1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，加入溶媒至刻度，搖勻、過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取濾液即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得每克重量之最大波峰面積為最佳八角茴香萃取溶媒。

（二）萃取次數考察

取本品粉末約1.0 g，精確秤定，置125 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No. 1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取濾液，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成份被萃取完全，並選出最佳萃取次數。

（三）對照標準品溶液

取標準品反式茴香腦(trans-anethole)精確稱定1.0 mg，加1 mL的甲醇製成每1 mL含反式茴香腦(trans-anethole) 1000 μg的標準品儲備溶液。

（四）檢品溶液

取本品粉末約1.0 g，精確秤定，置125 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No. 1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，殘渣部分重複提取一次，合併濾液，加甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, 0.45 μm)，取濾液即得。

（五）測定法       

分別精確吸取標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC測定，用標準曲線計算溶液中反式茴香腦(trans-anethole)的含量，即得。

（六）檢量線

精確吸取反式茴香腦(trans-anethole)標準品儲備溶液適量(1000 μg/mL)，以甲醇稀釋製成含反式茴香腦(trans-anethole)分別為125 μg/mL、62.5 μg/mL、31.25 μg/mL、15.625 μg/mL、7.8125 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R²。

（七）精密度試驗

以反式茴香腦(trans-anethole)濃度為62.5 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以反式茴香腦(trans-anethole)波峰面積為指標，求出相對標準差。

（八）再現性與穩定性試驗

1. 再現性:取同一家市售八角茴香粉末，依八角茴香檢品溶液製備方法平行製備五份八角茴香檢品溶液，進樣測定，以反式茴香腦(trans-anethole)含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性:取同一家市售八角茴香粉末，依八角茴香檢品溶液製備方法製備八角茴香檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以反式茴香腦(trans-anethole)鋒面積為指標，求出相對標準差。

（九）同日間與異日間試驗

取125、62.5、31.25 μg/ mL之反式茴香腦(trans-anethole)標準品溶液進行同日間測試(在24小時內每個濃度注射三次)與異日間測試(七天內注射三次，每次間隔24小時以上，每個濃度重複注射三次)，求其相對標準偏差值(%)以評估HPLC分析條件之穩定性與再現性。

（十）偵測極限與定量極限試驗

 偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧ 3:1時之濃度，作為偵測極限估計值；定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧ 10:1時之濃度，作為定量極限估計值。

（十一）添加回收率試驗

取已知反式茴香腦(trans-anethole)含量的八角茴香藥材粉末約0.125 g，精確稱定五份，分別加入0.391 mg的反式茴香腦(trans-anethole)，並按檢品溶液製備方法操作測定。