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虎杖
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虎杖

方法

(一)最佳萃取溶媒評估

取本品粉末3份,每份準確稱取0.1 g,置50 mL離心管中,準確加入100 %乙醇、75 %乙醇、50 %乙醇各25 mL,超音波振盪處理(功率300 W,頻率40 kHz) 30分鐘,取上清液過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 μm),即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC),以所測得之標準品虎杖苷和白藜蘆醇最大波峰面積為最佳虎杖萃取溶媒。

 

(二)最佳萃取次數評估

  準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約0.1 g,置50 mL離心管中,準確加50%乙醇25 mL,超音波振盪處理(功率300 W,頻率40 kHz) 30分鐘,離心10分鐘 (約4000 x g)。取上清液轉移至25 mL定量瓶中,加50%乙醇至刻度,搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 μm),即得。每針10 μL注入HPLC,殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣,直到指標成分被萃取完全,並選出最佳萃取次數。

 

(三)對照標準品溶液

1.  準確稱取標準品虎杖苷1.0 mg,加1 mL的乙醇製成每1 mL含虎杖苷1000 μg的標準品儲備溶液,並以乙醇稀釋至25 μg/mL製成虎杖苷對照標準品溶液。

2.  準確稱取標準品白藜蘆醇1.0 mg,加1 mL的乙醇製成每1 mL含白藜蘆醇1000 μg的標準品儲備溶液,並以乙醇稀釋至10 μg/mL製成白藜蘆醇對照標準品溶液。

 

(四)檢品溶液

    準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約0.1 g,置50 mL離心管中,準確加入50%乙醇25 mL,超音波振盪處理(功率300 W,頻率40 kHz) 30分鐘,離心10分鐘(約4000 x g),取上清液,殘渣部分重複提取1次,合併濾液,轉移至50 mL定量瓶中,加50%乙醇至刻度,搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 μm),即得。

 

(五)測定法

      準確吸取對照標準品溶液、檢品溶液10 μL,注入HPLC,測定,分別用標準曲線計算溶液中虎杖苷與白藜蘆醇的含量,即得。

 

(六)檢量線

1.  準確吸取虎杖苷標準品儲備溶液(1000 μg/mL)適量,以乙醇稀釋製成含虎杖苷分別為200、100、50、40、25、10 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析,利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸,並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2

2.  準確吸取白藜蘆醇標準品儲備溶液(1000 μg/mL)適量,以乙醇稀釋製成含白藜蘆醇分別為50、40、20、10、4.0、2.0 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析,利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸,並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2

 

(七)精密度試驗

      以虎杖苷及白藜蘆醇濃度分別為25 μg/mL與10 μg/mL之對照標準品溶液連續進樣5針,分別以虎杖苷及白藜蘆醇的波峰面積為指標,求出相對標準差。

 

(八)重複性與穩定性試驗

1.  重複性:取同一批市售虎杖粉末,依虎杖檢品溶液製備方法平行製備5份虎杖檢品溶液,進樣測定,以虎杖苷及白藜蘆醇的含量(%)為指標,求出相對標準差。

2.  穩定性:取同一批市售虎杖粉末,依虎杖檢品溶液製備方法製備虎杖檢品溶液,分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定,以虎杖苷及白藜蘆醇的波峰面積為指標,求出相對標準差。

 

(九)偵測極限與定量極限試驗

1.  偵測極限(Limit of Detection, LOD):將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並以訊號雜訊比為≧3:1時之濃度,作為偵測極限估計值。

2.  定量極限(Limit of Quantitation, LOQ):將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度,作為定量極限估計值。

 

(十)添加回收率試驗

1.  取已知虎杖苷含量的虎杖藥材粉末5份,每份準確稱取約0.05 g,分別加入1 mL的虎杖苷溶液(500 μg/mL),並按檢品溶液製備方法操作測定。

2.  取已知白藜蘆醇含量的虎杖藥材粉末5份,每份準確稱取約0.05 g,別加入1 mL的白藜蘆醇溶液(90 μg/mL),並按檢品溶液製備方法操作測定。