（一）最佳萃取溶媒評估
取本品粉末4份，每份準確稱取0.5 g，置50 mL離心管中，準確加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、25%甲醇各50 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，取上清液，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 μm)，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得之標準品綠原酸最大波峰面積為最佳金銀花萃取溶媒。
（二）最佳萃取次數評估
準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約0.5 g，置50 mL離心管中，準確加50%甲醇50 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，離心15分鐘 (約4000 x g)。取上清液轉移至50 mL定量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 μm)，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。
（三）對照標準品溶液
準確稱取標準品綠原酸1.0 mg，加1 mL的甲醇製成每1 mL含綠原酸1000 μg的標準品儲備溶液，並以甲醇稀釋至50 μg/mL製成綠原酸對照標準品溶液。
（四）檢品溶液
準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約0.5 g，置50 mL離心管中，準確加入50%甲醇50 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，離心15分鐘(約4000 x g)，取上清液，殘渣部分重複提取1次，合併濾液，轉移至100 mL定量瓶中，加50%甲醇至刻度。準確吸取溶液10 mL於25 mL定量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 μm)，即得。
（五）測定法
分別準確吸取對照標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中綠原酸的含量，即得。
（六）檢量線
準確吸取綠原酸標準品儲備溶液(1000 μg/mL)適量，以甲醇稀釋製成含綠原酸分別為250、100、75、50、25、10 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2。
（七）精密度試驗
以綠原酸濃度為50 μg/mL之標準品儲備液連續進樣5針，以綠原酸的波峰面積為指標，求出相對標準差。
（八）重複性與穩定性試驗
1. 重複性：取同一批市售金銀花藥材粉末，依金銀花藥材檢品溶液製備方法平行製備5份金銀花藥材檢品溶液，進樣測定，以綠原酸的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一批市售金銀花藥材粉末，依金銀花檢品溶液製備方法製備金銀花檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以綠原酸的波峰面積為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
1. 偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀 釋，並以訊號雜訊比為≧3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。
2. 定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）添加回收率試驗
取已知綠原酸含量的金銀花藥材粉末5份，每份準確稱取各約0.25 g，分別加入約6.5 mg的綠原酸，並按檢品溶液製備方法操作測定。 |
