（一）最佳萃取條件開發
取本品粉末6份，每份準確稱取0.5 g，置50 mL離心管中，準確加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、95%乙醇、75%乙醇、50%乙醇各25 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，離心5分鐘(約3000 ´ g)，以No.1濾紙過濾，取濾液移入25 mL之容量瓶中，加溶媒至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 mm)，即得。每針10 mL注入HPLC，以所測得每克重量之標準品尿囊素最大峰面積為最佳山藥萃取溶媒。
（二）最佳萃取次數評估
準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約0.5 g，置50 mL 離心管中，準確加入75%乙醇25 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，離心5分鐘(約3000 ´ g)，以No.1濾紙過濾，取濾液移入25 mL之容量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻再過濾(Syring filter，PTFE 0.45 mm)，即得。每針10 mL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。
（三）對照標準品溶液
準確稱取標準品尿囊素5.0 mg，加10 mL的75%乙醇製成每1 mL含尿囊素500 μg的標準品儲備溶液，並以75%乙醇稀釋至20 μg/mL製成對照標準品溶液。
（四）檢品溶液
準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約 0.5 g，置50 mL離心管中，加入75%乙醇25 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，離心5分鐘(約3000 ´ g)，以No.1濾紙過濾，取濾液，殘渣部分重複提取1次，合併濾液，移入50 mL之容量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 mm)，即得。
（五）測定法
分別準確吸取對照標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中尿囊素的含量，即得。
（六）檢量線
準確吸取尿囊素標準品儲備液適量(500 μg/mL)，以75%乙醇稀釋成含尿囊素分別為200、100、40、20、10、5.0、2.5 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2。
（七）精密度試驗
以尿囊素濃度為20 μg/mL之對照標準品溶液連續進樣5針，以尿囊素的波峰面積為指標，求出相對標準差。
（八）重複性與穩定性試驗
1. 重複性：取同一批市售山藥粉末，依山藥檢品溶液製備方法平行製備5份山藥檢品溶液，進樣測定，以尿囊素的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一批市售山藥粉末，依山藥檢品溶液製備方法製備山藥檢品溶液，分別在0、2、4、8、24小時進樣測定，以尿囊素的含量為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
1. 偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。
2. 定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）添加回收率試驗
取已知尿囊素含量的山藥粉末5份，每份準確稱取約0.25 g，分別加入尿囊素0.8 mg，並按檢品溶液製備方法操作測定。 |
