（一）最佳萃取條件評估
取本品粉末6份，每份準確稱取0.5 g，置50 mL離心管中，準確加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇各30 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No. 1濾紙過濾，取濾液，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.22 μm)，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得每克重量之標準品柚皮苷最大波峰面積為最佳化橘紅萃取溶媒。
（二）最佳萃取次數評估
準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約0.5 g，置50 mL離心管中，準確加入甲醇30 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No. 1濾紙過濾，取濾液移入30 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.22 μm)，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。
（三）對照標準品溶液
準確稱取標準品柚皮苷 3.0 mg，加2.0 mL的甲醇製成每1 mL含柚皮苷1500 μg的標準品儲備溶液，並以甲醇稀釋至60 μg/mL製成對照標準品溶液。
（四）檢品溶液
準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約0.5 g，置50 mL離心管中，準確加入甲醇30 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No.1濾紙過濾，取濾液，殘渣部分重複提取2次，合併濾液，移入100 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.22 μm)，即得。
（五）測定法
分別準確吸取對照標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，用標準曲線分別計算溶液中柚皮苷的含量，即得。
（六）檢量線
準確吸取柚皮苷標準品儲備溶液適量(1500 μg/mL)，以甲醇稀釋成含柚皮苷分別為500、300、100、60、30 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2。
（七）精密度試驗
以柚皮苷為60 μg/mL之對照標準品溶液連續進樣5針，以柚皮苷的波峰面積為指標，求出相對標準差。
（八）重複性與穩定性試驗
1. 重複性：取同一批市售化橘紅藥材粉末，依化橘紅藥材檢品溶液製備方法平行製備5份化橘紅檢品溶液，進樣測定，以柚皮苷的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一批市售化橘紅藥材粉末，依化橘紅藥材檢品溶液製備方法製備化橘紅檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以柚皮苷的波峰面積為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
1. 偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。
2. 定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）添加回收率試驗
取已知柚皮苷含量的化橘紅藥材粉末5份，每份準確稱取約0.2 g，分別加入柚皮苷 5.0 mg，並按檢品溶液製備方法操作測定。 |
