方法
（一）最佳萃取溶媒與方法評估
取本品粉末4份，每份準確稱取1.0 g，置50 mL離心管中，其中2份準確加入甲醇、75 %甲醇各20 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，另外2份同樣準確加入甲醇、75 %甲醇各20 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz，溫度50 oC) 30分鐘，取上清液過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 μm)，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得之標準品芒柄花素最大波峰面積為最佳紅耆萃取溶媒。
（二）最佳萃取次數評估
準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約1.0 g，置50 mL離心管中，準確加甲醇20 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，離心10分鐘 (約4000 x g)。取上清液移入25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 μm)，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。
（三）對照標準品溶液
準確稱取標準品芒柄花素1.0 mg，加1 mL的甲醇製成每1 mL含芒柄花素1000 μg的標準品儲備溶液，並以甲醇稀釋至10 μg/mL製成芒柄花素對照標準品溶液。
（四）檢品溶液
準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約1.0 g，置50 mL離心管中，準確加入甲醇20 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 30分鐘，離心10分鐘(約4000 x g)，取上清液，殘渣部分重複提取1次，合併濾液，濃縮至少量後，移入25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 μm)，即得。
（五）測定法
準確吸取對照標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，分別用標準曲線計算溶液中芒柄花素的含量，即得。
（六）檢量線
準確吸取芒柄花素標準品儲備溶液(1000 μg/mL)適量，以甲醇稀釋製成含芒柄花素分別為50、20、15、10、5.0、2.0 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2。
（七）精密度試驗
以芒柄花素濃度為10 μg/mL之對照標準品溶液連續進樣5針，分別以芒柄花素的波峰面積為指標，求出相對標準差。
（八）重複性與穩定性試驗
1. 重複性：取同一批市售紅耆粉末，依紅耆檢品溶液製備方法平行製備5份紅耆檢品溶液，進樣測定，以芒柄花素的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一批市售紅耆粉末，依紅耆檢品溶液製備方法製備紅耆檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以芒柄花素的波峰面積為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
1. 偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。
2. 定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）添加回收率試驗
取已知芒柄花素含量的紅耆藥材粉末5份，每份準確稱取約0.50 g，分別加入1 mL的芒柄花素溶液(80 μg/mL)，並按檢品溶液製備方法操作測定。 |
