方法

（一）最佳萃取溶媒評估

取本品粉末6份，每份準確稱定0.5 g，置50 mL離心管中，準確加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇各25 mL，超音波振盪處理(功率300W，頻率40 kHz) 30分鐘，取上清液過濾(syringe filter, PTFE 0.45 μm)，即得。每針10 μL注入高效液相層析儀(HPLC)，以所測得之標準品芸香苷最大波峰面積為最佳桑葉萃取溶媒。

（二）最佳萃取次數評估

準確稱取本品粉末約0.5 g，置50 mL離心管中，準確加入50%乙醇25 mL，超音波振盪處理(功率300W，頻率40 kHz) 30分鐘，取上清液過濾(syringe filter, PTFE 0.45 μm)，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。

（三）對照標準品溶液

準確稱取標準品芸香苷水合物1.0 mg，加5 mL 50%乙醇製成每1 mL含芸香苷200 μg的標準品儲備溶液，並以50%乙醇稀釋至15 μg/mL製成對照標準品溶液。

（四）檢品溶液

準確稱取本品粉末約0.5 g，置50 mL離心管中，準確加入50%乙醇25 mL，超音波振盪處理(功率300W，頻率40 kHz) 30分鐘，取上清液，殘渣部分重複提取1次，合併上清液，移入50 mL之容量瓶中，加50%乙醇至刻度，搖勻再過濾(syringe filter, PTFE 0.45 μm)，即得。

（五）測定法

準確吸取對照標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中標準品芸香苷的含量，即得。

（六）檢量線

準確吸取芸香苷標準品儲備溶液(200 μg/mL)適量，以50%乙醇稀釋製成含芸香苷分別為50、40、30、25、20、15、10、5.0 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R²。

（七）精密度試驗

以芸香苷濃度為15 μg/mL之對照標準品溶液連續進樣5針，以芸香苷的波峰面積為指標，求出相對標準差。

（八）重複性與穩定性試驗

1. 重複性：取同一批市售桑葉粉末，依桑葉檢品溶液製備方法平行製備五份桑葉檢品溶液，進樣測定，以芸香苷的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一批市售桑葉粉末，依桑葉檢品溶液製備方法製備桑葉檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以芸香苷的波峰面積為指標，求出相對標準差。

（九）偵測極限與定量極限試驗

1. 偵測極限(limit of detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比≧3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。

2. 定量極限(limit of quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。

（十）添加回收率試驗

取已知芸香苷含量的桑葉粉末5份，每份準確稱取約0.25 g，分別加入0.3 mL的芸香苷溶液(1.0 mg/mL)，並按檢品溶液製備方法操作測定。