中醫藥品質分析(qaTCM)
中草藥分析 結構搜尋 指標成分列表 研究人員列表 聯絡我們
中藥品質分析首頁 > 淡竹葉 > 方法
淡竹葉
藥材簡介
藥材材料
顯微鑑定
方法
HPLC分析
UPLC分析
TLC鑑定
化學成分
 
淡竹葉

(Danzhuye; Lophatherum gracile Brongn.)

(一)萃取溶媒開發

1.    秤取5份,各0.5 g之市售淡竹葉粉末(經20 mesh過篩),分別放入15 mL 離心管。

2.    每管分別加入10 mL 的100% EtOH, 75% EtOH, 50% EtOH, 30% EtOH, 25% EtOH,超音波(40 kHz)震盪30 min。

3.    離心(5000 rpm)10 min,將上清液置入量筒中。

4.    殘渣再加入10 mL 與第一次萃取相同比例之溶劑,超音波(40 kHz)震盪 30 min。

5.    離心 (5000 rpm) 10 min,將上清液置入量筒中,並加入與萃取用之相同溶劑定量至20 mL。

6.    使用0.22 μm nylon的濾膜過濾,取濾液進行HPLC分析。

(二)萃取次數考察

    取本品粉末約0.5 g,精密秤定,置15 mL 離心瓶中,精確加入30% 乙醇10 mL,超音波震盪處理(頻率40 kHz) 30分鐘,離心10 min (5000 rpm) 後將上清液置入10 mL 定量瓶中,加30%乙醇至刻度,搖勻,使用0.22 μm  nylon的濾膜過濾(Syringe filter, 0.22 μm),濾液每針20 μL注入HPLC,殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣,直到指標成份被萃取完全,並選出最佳萃取次數。

(三)對照標準品溶液

    標準品1和異葒草素(2)各精密稱取2.0 mg,分別以1 mL的30%乙醇和1 mL 70%乙醇溶解,配製成每1 mL分別含2000 μg的化合物1 和異葒草素(2)標準品的儲備溶液。

(四)檢品溶液

1.    秤取0.5 g 淡竹葉藥材磨碎過篩(20 mesh)完之粉末,放入15 mL離心管中。

2.    加入10 mL 30% EtOH,超音波(40 kHz)震盪15 min。

3.    離心(5000 rpm)10 min,將上清液置入量筒中。

4.    殘渣再加入10 mL 30% EtOH,超音波(40 kHz)震盪15 min。

5.    離心(5000 rpm) 10 min,將上清液置入量筒中,並加入30% EtOH定量至20 mL。使用0.22 μm nylon的濾膜過濾溶液後即可分析。

(五)測定法

分別精確吸取標準品溶液、檢品溶液20 μL,注入HPLC測定,用標準曲線計算溶液中的含量即得。

(六)檢量線

取標準品1精確稱取2.0 mg,加1 mL的30%乙醇,取標準品異葒草素(2)各精確稱取2.0 mg,加1 mL 70%乙醇製成每1 mL各別含2000 μg的1和異葒草素標準品儲備溶液,再進行連續稀釋分別準備0.5, 1, 5, 10, 50, 125, 250, 500,μg/mL及1, 2, 5, 10, 20, 100, 200, 500 μg/mL等不同濃度的標準品。各別注入20 μL得到吸光面積的積分值與濃度間的關係,利用標準品之波鋒面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸,並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2

(七)精密度試驗

    化合物1和異葒草素(2)分別為 100和250 μg/mL濃度之標準品稀釋液連續進樣三針,以12波峰面積為指標,求出相對標準差。

(八)再現性與穩定性試驗

1. 再現性:取同一家市售淡竹葉粉末,依檢品溶液製備方法平行製備三份檢品溶液,進樣測定,以化合物1和異葒草素(2)含量(%)為指標,求出相對標準差。

2. 穩定性:取同一家市售淡竹葉粉末,精確秤取約0.5 g,依檢品溶液製備方法製備檢品溶液,分別在0、8、24小時進樣測定,以化合物1和異葒草素(2)峰面積為指標,求出相對標準差。

(九)偵測極限與定量極限試驗

    偵測極限(Limit of Detection, LOD):將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並以訊號雜訊比≥ 3:1時之濃度,作為偵測極限估計值;定量極限(Limit of Quantitation, LOQ):將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並以訊號雜訊比≥ 10:1時之濃度,作為定量極限估計值。

(十)同日間與異日間試驗

取化合物1和異葒草素(2)濃度分別為570和 530; 280和260及 30 和30 μg/mL之標準品溶液進行同日間測試(在8小時內每個濃度注射三次)與異日間測試(每24小時連續注射三次)並且各做三重複,求其相對標準差(R.S.D.,%),以評估HPLC分析條件之穩定性與再現性。

(十一)添加回收率試驗

    取本品粉末約0.5 g三份,精確秤定,置於15 mL離心瓶中,精確加入三種不同濃度已溶解完全之標準品1和異葒草素(2)溶液,隨後依檢品溶液製備方式製備出三份不同添加量之檢品溶液。取20 μL注入HPLC,每個檢測品進行三重複。