（一）萃取溶媒開發：

取本品粉末約1.0 g，六份，精確稱定，置50 mL離心管中，精密加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇各20 mL，超音波振盪處理(功率400 W，頻率40 kHz)30分鐘，離心15分鐘(4000 rpm)，取上清液，過濾，取續濾液，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀，以所測得每單位重量之最大波峰面積為最佳北茵陳萃取溶媒。

（二）萃取次數考察：

取本品粉末約1.0 g，精確稱定，置50 mL離心管中，精確加入50%甲醇15 mL，超音波振盪處理(功率400 W，頻率40 kHz)30分鐘，離心15分鐘(4000 rpm)，取上清液過濾，取續濾液，即得。每針以10 μL注入高效能液相層析儀，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。

（三）對照標準品溶液：

取標準品原兒茶酸(protocatechuic acid)適量，精密稱定，加50%甲醇製成每1 mL含原兒茶酸(protocatechuic acid)212.8 μg的標準品儲備溶液。

（四）檢品溶液：

取本品粉末約1.0 g，精確稱定，置50 mL離心管中，精確加入50%甲醇15 mL，超音波振盪處理(功率400 W，頻率40 kHz)30分鐘，離心15分鐘(4000 rpm)，將上清液轉移至50 mL定量瓶中，殘渣部分重複提取二次，合併上清液，以50%甲醇定容至50 mL，搖勻，過濾，取續濾液，即得。

（五）測定法：

分別精密吸取標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入液相層析儀，測定，用標準曲線計算檢品溶液中原兒茶酸(protocatechuic acid)的含量，即得。

（六）檢量線製作：

精密吸取原兒茶酸(protocatechuic acid)標準品儲備液適量，以50%甲醇稀釋製成含原兒茶酸(protocatechuic acid)分別為6.65 μg/mL、13.3 μg/mL、26.6 μg/mL、53.2 μg/mL、106.4 μg/mL的標準品溶液。

（七）精密度試驗：

以原兒茶酸(protocatechuic acid)濃度為26.6 μg/mL之標準品溶液連續進樣五針，以原兒茶酸(protocatechuic acid)波峰面積為指標，求出相對標準差。

（八）重複性與樣品穩定性試驗：

1. 重複性：取同一家市售北茵陳粉末，依北茵陳檢品溶液製備方法平行製備五份北茵陳檢品溶液，進樣測定，以原兒茶酸(protocatechuic acid)含量(%)為指標，求出相對標準差。

2. 樣品穩定性：取同一家市售北茵陳粉末，精確稱取約1.0 g，依北茵陳檢品溶液製備方法製備北茵陳檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以原兒茶酸(protocatechuic acid)波峰面積為指標，求出相對標準差。

（九）偵測極限與定量極限試驗：

1. 偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為3:1時之濃度，作為偵測極限之估計值。

2. 定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為10:1時之濃度，作為定量極限之估計值。

（十）添加回收率試驗：

取已知原兒茶酸(protocatechuic acid)含量的北茵陳藥材粉末約0.5 g，精密稱定五份，分別加入0.5984 mg的原兒茶酸(protocatechuic acid)，按檢品溶液製備方法操作、測定。