（Sophora japonica）
（一）萃取溶媒開發
取本品粉末四份，每份精確稱定200 mg，置125 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇、75%甲醇、乙醇、75%乙醇各50 mL，超音波震盪處理(功率200W，頻率40kHz) 30分鐘，以No. 1濾紙過濾至50 mL之定量瓶中，加入溶媒至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.45 mm)，取濾液，即得。每針10 mL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以最大峰所測得之最大面積為槐花最佳萃取溶媒。
（二）萃取次數考察
取本品粉末約200 mg，精確秤定，置125 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇50 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以濾紙過濾至50 mL之定量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.45 mm)，取濾液，即得。每針10 mL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法萃取、進樣，選出最佳萃取次數。
（三）對照標準品溶液
取標準品Rutin trihydrate精確稱定20 mg，加10 mL的甲醇製成每1 mL含芸香苷(Rutin) 1814 mg的標準品儲備溶液。
（四）檢品溶液
取本品粉末約200 mg，精確稱定，置125 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇50 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No. 1濾紙過濾至50 mL之定量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, 0.45 mm)，取濾液，即得。
（五）測定法
分別精確吸取標準品溶液、檢品溶液10 mL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中芸香苷的含量，即得。
（六）檢量線
精確吸取芸香苷標準品儲備溶液適量(1814 mg/mL)，以甲醇稀釋製成含芸香苷(Rutin)分別為1360 mg/mL 、907 mg/ mL、453 mg/ mL、227 mg/mL、90.7 mg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 mL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2。
（七）精密度試驗
以芸香苷濃度為453 mg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以芸香苷(Rutin)波峰面積為指標，求出相對標準差。
（八）再現性與穩定性試驗
1. 再現性：取同一家市售槐花粉末，依槐花檢品溶液製備方法平行製備五份槐花檢品溶液，進樣測定，以芸香苷(Rutin)含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一家市售槐花粉末，精確秤取約200 mg，依槐花檢品溶液製備方法製備槐花檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以芸香苷(Rutin)峰面積為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≥ 3:1時之濃度，作為偵測極限估計值；定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≥ 10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）同日間與異日間試驗
取907、453、227 mg/mL之標準品溶液進行同日間測試(在24小時內每個濃度注射三次)與異日間測試(七天內注射三次，每次間隔24小時以上，每個濃度重複注射三次)，求其相對標準差(R.S.D.，%)，以評估HPLC分析條件之穩定性與再現性。
（十一）添加回收率試驗
取本品粉末五份，每份約200 mg，精確稱定，加入1 mL rutin trihydrate溶液(10 mg/mL)，置125 mL三角錐形瓶中，再加入甲醇50 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No. 1濾紙過濾至50 mL之定量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.45 mm)，每份樣品取10 mL注入HPLC。
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