方法
（一）對照標準品溶液
取標準品1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)精確稱定2.5 mg，加甲醇定體積至50 mL，配製成每1 mL含50.0 μg，1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)。
（二）檢品溶液
取本品粉末約0.2 g，精確稱定，精確加入75% EtOH 20 mL，置濃縮瓶中，連接迴流冷凝裝置，置水鍋上迴流萃取60分鐘，冷卻，以125 mm No.1濾紙過濾。定容至25 mL，搖勻再過濾(Syringe filter, 0.22 μm)，即得。
（三）測定法
分別精確吸取標準品溶液與檢品溶液各10 mL，注入HPLC測定，用 標準曲線計算溶液中，1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)的含量，即得。
（四）檢量線
精確吸取1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)標準品儲備液適量(50.0 μg/mL)，以100%甲醇稀釋成含1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)分別為37.5 μg/mL、25.0 μg/mL、12.5 μg/mL、5.0 μg/mL的標準品溶液。上述溶液各取10 μL分別注入HPLC，進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2。
（五）精密度試驗
以1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)濃度為25.0 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)波峰面積為指標，求出相對標準差。
（六）再現性與穩定性試驗
1. 再現性:取同一家市售白及粉末，依白及檢品溶液製備方法平行製備五份白及檢品溶液，進樣測定，以1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性:取同一家市售白及粉末，依白及檢品溶液製備方法製備白及檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)的含量為指標，求出相對標準差。
（七）偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(Limit of Detection, LOD): 將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧ 3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。定量極限Limit of Quantitation, LOQ): 將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧ 10/1時之濃度，作為定量極限估計值。
（八）添加回收率試驗
取已知1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)含量的白及藥材粉末0.05 g，精確稱定三份，分別加入0.5 mg、1.0 mg、1.5 mg的1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)，並按檢品溶液製備方法製備，每次取10 μL注入。 |
