方法
（一）萃取次數考察
取本品粉末約1.0 g，精確稱定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇20 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No.1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過濾(Syring filter，0.45 μm)，取濾液，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，選出最佳萃取次數。
（二）溶劑配製
甲醇：0.1%磷酸(20：80至90：10)之混液。
（三）對照標準品溶液
取標準品香豆素(Coumarin)精確稱定10.0 mg，加甲醇定體積至10 mL製成每1 mL含1.0 mg香豆素(Coumarin)。
（四）檢品溶液
取本品粉末約1.0 g，精確稱定，置50 mL三角錐形瓶中，加入甲醇20 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，放置室溫，以No.1濾紙過濾。殘渣部分重複提取2次，合併濾液，轉移至100 mL濃縮瓶，減壓濃縮去除多量的甲醇，經微孔濾膜 (Syringe filter, 0.45 μm)過濾至25 mL定量瓶，加甲醇定容至刻度，即得。
（五）測定法
分別精確吸取標準品溶液與檢品溶液10 μL，注入液相層析儀，測定，用標準曲線計算溶液香豆素(Coumarin)的含量，即得。
（六）檢量線
精確吸取香豆素(Coumarin)標準品儲備溶液(1.0 mg/mL)各0.1、0.25、0.5、1.0、5.0、10.0 mL，以甲醇溶液定體積至10 mL配製成香豆素(Coumarin)分別為10.0、25.0、50.0、100、500、1000 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入液相層析儀進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度 (x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2。
（七）精密度試驗
以香豆素(Coumarin)濃度為500 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以香豆素(Coumarin)波峰面積為指標，求出相對標準差。
（八）再現性與穩定性試驗
1. 再現性：取同一批市售佩蘭粉末，依佩蘭檢品溶液製備方法平行製備五份佩蘭檢品溶液，進樣測定，以香豆素(Coumarin)的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一批市售佩蘭粉末，依佩蘭檢品溶液製備方法製備佩蘭檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以香豆素(Coumarin)的含量為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。定量極限Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）添加回收率試驗
取本品粉末約1.0 g，精確稱定三份，分別加入0.5、1.0、1.5 mg的香豆素(Coumarin)標準品，並按檢品溶 液製備方法製備，每次取10 μL注入液相層析儀，每個檢測品進行三重複。 |
