方法

(一)   萃取次數考察

    取本品粉末約1.0 g，精確稱定，置100 mL三角錐形瓶中，精確加入70%甲醇25 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，放置室溫，以No.1濾紙過濾至25 mL定量瓶中，加入溶媒至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.22 μm)，取濾液，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。

(二)   對照標準品溶液

    取標準品芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)精確稱定1.0 mg，加1 mL的純水製成每1 mL含芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate) 1000 μg的標準品儲備溶液，芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)溶於甲醇時於室溫下會產生質變，溶於純水中穩定性較高。

(三)   檢品溶液

    取本品粉末約1.0 g，精確稱定，置100 mL三角錐形瓶中，精確加入70%甲醇25 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，放置室溫，以No.1濾紙過濾。殘渣部分重複提取2次，合併濾液，減壓濃縮至少量，轉移至25 mL之定量瓶中，加入溶媒至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.22 μm)，取濾液，即得。

(四)   測定法  

    分別精確吸取標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)的含量，即得。

(五)   檢量線

    精確吸取芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)標準品儲備溶液適量(1000 μg/mL)，以純水稀釋製成含芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)分別為31.25 μg/mL、62.5 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R²。

(六)   精密度試驗

    以芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)濃度為62.5 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)波峰面積為指標，求出相對標準差。

(七)   再現性與穩定性試驗

1. 再現性:取同一批市售萊菔子粉末，依萊菔子檢品溶液製備方法平行製備五份萊菔子檢品溶液，進樣測定，以芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性:取同一批市售萊菔子粉末，依萊菔子檢品溶液製備方法製備萊菔子檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)波峰面積為指標，求出相對標準差。

(八)   同日間與異日間試驗

    取62.5、125、250 μg/mL之芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)標準品溶液進行同日間測試(在24小時內每個濃度注射三次)與異日間測試(七天內注射三次，每次間隔24小時以上，每個濃度重複注射三次)，求其相對標準偏差值(%)以評估HPLC分析條件之穩定性與再現性。

(九)   偵測極限與定量極限試驗

    偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧3:1時之濃度，作為偵測極限估計值；定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。

(十)   添加回收率試驗

    取已知芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)含量的萊菔子藥材粉末約0.5 g，精確稱定三份，分別加入0.4 mg、0.8 mg、1.2 mg的芥子鹼硫氰酸鹽(Sinapine thiocyanate)，並按檢品溶液製備方法操作測定。