（一）萃取溶媒開發：

取本品粉末約0.2 g，四份，精確稱定，置50 mL離心管中，精密加入甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇各15 mL，超音波震盪處理(功率400 W，頻率40 kHz)30分鐘，離心15分鐘(4000 rpm)，取上清液，過濾，取續濾液，即得。每針10 µL注入高效能液相層析儀，以所測得每單位重量之最大波峰面積為最佳栝樓仁萃取溶媒。

（二）萃取次數考察：

取本品粉末約0.2 g，精確稱定，置50 mL離心管中，精確加入乙醇10 mL，超音波震盪處理(功率400 W，頻率40 kHz)30分鐘，離心15分鐘(4000 rpm)，取上清液過濾，取續濾液，即得。每針以10 µL注入高效能液相層析儀，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。

（三）對照標準品溶液：

取標準品3,29-二苯甲醯基栝樓仁三醇(3,29-Dibenzoyl rarounitriol)適量，精密稱定，加乙醇製成每1 mL含3,29-二苯甲醯基栝樓仁三醇(3,29-Dibenzoyl rarounitriol)148.8 µg的標準品儲備溶液。

（四）檢品溶液：

取本品粉末約0.2 g，精確稱定，置50 mL離心管中，精確加入乙醇10 mL，超音波震盪處理(功率400 W，頻率40 kHz)30分鐘，離心15分鐘(4000 rpm)，將上清液轉移至25 mL定量瓶中，殘渣部分重複提取一次，合併上清液，加乙醇定容至25 mL，搖勻，過濾，取續濾液，即得。

（五）測定法：

分別精密吸取標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入液相層析儀，測定，用標準曲線計算檢品溶液中3,29-二苯甲醯基栝樓仁三醇(3,29-Dibenzoyl rarounitriol)的含量，即得。

（六）檢量線製作：

精密吸取3,29-二苯甲醯基栝樓仁三醇(3,29-Dibenzoyl rarounitriol)標準品儲備液適量，以乙醇稀釋製成含3,29-二苯甲醯基栝樓仁三醇(3,29-Dibenzoyl rarounitriol)分別為2.33 μg/mL、4.65 μg/mL、9.30 μg/mL、18.60 μg/mL、37.20 μg/mL的標準品溶液。

（七）精密度試驗：

以3,29-二苯甲醯基栝樓仁三醇(3,29-Dibenzoyl rarounitriol)濃度為9.30 μg/mL之標準品溶液連續進樣五針，以3,29-二苯甲醯基栝樓仁三醇(3,29-Dibenzoyl rarounitriol)波峰面積為指標，求出相對標準差。

（八）重複性與樣品穩定性試驗：

1. 重複性：取同一家市售栝樓仁粉末，依栝樓仁檢品溶液製備方法平行製備五份栝樓仁檢品溶液，進樣測定，以3,29-二苯甲醯基栝樓仁三醇(3,29-Dibenzoyl rarounitriol)含量(%)為指標，求出相對標準差。

2. 樣品穩定性：取同一家市售栝樓仁粉末，精確稱取約0.2 g，依栝樓仁檢品溶液製備方法製備栝樓仁檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以3,29-二苯甲醯基栝樓仁三醇(3,29-Dibenzoyl rarounitriol)波峰面積為指標，求出相對標準差。

（九）偵測極限與定量極限試驗：

1. 偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為3:1時之濃度，作為偵測極限之估計值。

2. 定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為10:1時之濃度，作為定量極限之估計值。

（十）添加回收率試驗：

取已知3,29-二苯甲醯基栝樓仁三醇(3,29-Dibenzoyl rarounitriol)含量的栝樓仁藥材粉末約0.1 g，精密稱定五份，分別加入0.0350 mg的3,29-二苯甲醯基栝樓仁三醇(3,29-Dibenzoyl rarounitriol)，按檢品溶液製備方法操作、測定。