方法
（一）最佳萃取條件評估
取本品粉末2份，每份準確稱取0.75 g，置100 mL圓底瓶中，準確加入75%甲醇各50 mL，加熱迴流 1小時，冷卻後以No. 1濾紙過濾，濾液轉移至50 mL定量瓶中，加入溶媒至刻度。續取濾液4份，每份準確量取25 mL置100 mL三角瓶中，2份分別各加鹽酸5 mL，2份分別各加10%鹽酸 5 mL，置水浴80 °C加熱1小時或加熱迴流1小時，冷卻後，轉移至50 mL定量瓶中，加75%甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.22 μm)，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得每克重量之標準品山柰素最大波峰面積為最佳木賊萃取溶媒。
（二）最佳萃取時間評估
準確稱取本品粉末(過第20號篩網) 2份，每份準確稱取0.75 g，置100 mL圓底瓶中，準確加入75%甲醇各50 mL，加熱迴流1小時，冷卻後以No. 1濾紙過濾，濾液轉移至50 mL定量瓶中，加入溶媒至刻度。續取濾液4份，每份準確量取25 mL置100 mL三角瓶中，加鹽酸5 mL，分別置水浴80 °C加熱1小時、2小時、3小時、4小時，冷卻後，並轉移至50 mL定量瓶中，加75%甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.22 μm)，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以測得標準品山柰素最大波峰面積為最佳木賊萃取時間。
（三）對照標準品溶液
準確稱取標準品山柰素3.0 mg，加10 mL甲醇製成每1 mL含300 μg的標準品儲備溶液，並以甲醇稀釋至30 μg/mL製成對照標準品溶液。
（四）檢品溶液
準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約 0.75 g，置100 mL圓底瓶中，準確加入75%甲醇50 mL，加熱迴流1小時，冷卻後以No. 1濾紙過濾，濾液轉移至50 mL定量瓶中，加入75%甲醇至刻度。續取濾液25 mL置100 mL三角瓶中，加鹽酸 5 mL，置水浴80 °C加熱2小時，冷卻後，轉移至50 mL定量瓶中，加75%甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.22 mm)，即得。
（五）測定法
分別準確吸取對照標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中山柰素的含量，即得。
（六）檢量線
準確吸取山柰素標準品儲備液適量(300 μg/mL)，以甲醇稀釋成含山柰素分別為200、100、50、30、15、5.0 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2。
（七）精密度試驗
以山柰素濃度為30 μg/mL之對照標準品溶液連續進樣5針，以山柰素的波峰面積為指標，求出相對標準差。
（八）重複性與穩定性試驗
1. 重複性：取同一批市售木賊粉末，依木賊檢品溶液製備方法平行製備5份木賊檢品溶液，進樣測定，以山柰素的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一批市售木賊粉末，依木賊檢品溶液製備方法製備木賊檢品溶液，分別在0、2、4、8、24小時進樣測定，以山柰素的含量為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
1. 偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。
2. 定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）添加回收率試驗
取已知山柰素含量的木賊粉末5份，每份準確稱取各約0.2 g，分別加入1 mL的山柰素溶液(0.6 mg/mL)，並按檢品溶液製備方法操作測定。
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