方法
(一)對照標準品溶液
取標準品橙皮柑(Hesperidin)精確秤定1 mg,加甲醇定體積至10 mL 製成每1 mL含0.1 mg橙皮柑(Hesperidin)。
(二)檢品溶液
取本品粉末約0.2 g,精確秤定,置100 mL濃縮瓶中,精確加入甲醇20 mL,置水鍋上迴流加熱1小時,放冷,以No.1濾紙過濾至50 mL之定量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻再過濾(Syringe filter, 0.22 mm),即得。
(三)測定法
分別精確吸取標準品溶液與檢品溶液10 mL,注入HPLC,測定,用 標準曲線計算溶液中橙皮柑(Hesperidin)的含量,即得。
(四)檢量線
精確吸取橙皮柑(Hesperidin)標準品儲備液適量(100 μg/mL),以100%甲醇稀釋成含橙皮柑(Hesperidin)分別為60 μg/mL、30 μg/mL、15 μg/mL、3 μg/mL、1 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 mL分別注入HPLC進行定量分析,利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸,並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R2。
(五)精密度試驗
以橙皮柑(Hesperidin)濃度為60 mg/mL之標準品儲備液連續進樣五針,以橙皮柑(Hesperidin)波峰面積為指標,求出相對標準差。
(六)再現性與穩定性試驗
1. 再現性:取同一家市售橘紅粉末,依橘紅檢品溶液製備方法平行製備 五份橘紅檢品溶液,進樣測定,以橙皮柑(Hesperidin)的含量(%)為指標,求出相對標準差。
2. 穩定性:取同一家市售橘紅粉末,依橘紅檢品溶液製備方法製備橘紅檢品溶液,分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定,以橙皮柑(Hesperidin)的含量為指標,求出相對標準差。
(七)偵測極限與定量極限試驗
偵測極限(Limit of Detection, LOD): 將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並以訊號雜訊比為≧ 3:1時之濃度,作為偵測極限估計值。定量極Limit of Quantitation, LOQ): 將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋,並以訊號雜訊比為≧ 10/1時之濃度,作為定量極限估計值。
(八)添加回收率試驗
取已知橙皮柑(Hesperidin)含量的橘紅藥材粉末0.05 g,精確秤定五份,分別加入約0.5 mg的橙皮柑(Hesperidin),並按檢品溶液製備方法製備,每次取10 μL注入。 |