（一）萃取溶媒開發

取本品粉末七份，每份精確稱定1.0 g，置50 mL三角錐形瓶中，精密加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇、水各12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No.1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，加入溶媒至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.22 μm)，取濾液，即得。每針10 μL注入高效能液相層析儀(HPLC)，以所測得每克重量之最大峰面積為最佳蓽澄茄萃取溶媒。

（二）萃取次數考察

取本品粉末約1.0 g，精確秤定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No.1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過濾(Syringe filter, 0.22μm)，取濾液，即得。每針10 μL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成份被萃取完全，並選出最佳萃取次數。

（三）對照標準品溶液

    取標準品亞麻仁油酸(Linoleic acid)精密稱定1.0 mg，加1 mL的甲醇製成每1 mL含亞麻仁油酸(Linoleic acid) 1000 μg的標準品儲備溶液。

（四）檢品溶液

    取本品粉末約1.0 g，精確秤定，置50 mL三角錐形瓶中，精確加入甲醇12.5 mL，超音波震盪處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，以No.1濾紙過濾至25 mL之定量瓶中，殘渣部分重複提取一次，合併濾液，加甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, 0.22 μm)，取濾液，即得。

（五）測定法       

    分別精確吸取標準品溶液、檢品溶液10μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中亞麻仁油酸(Linoleic acid)的含量，即得。

（六）檢量線

    精確吸取亞麻仁油酸(Linoleic acid)標準品儲備溶液適量(1000 μg/mL)，以甲醇稀釋製成含亞麻仁油酸(Linoleic acid) 分別為50 μg/mL、 100 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL、1000 μg/mL及1500 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波鋒面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y=ax+b與相關係數R²。

（七）精密度試驗

    以亞麻仁油酸(Linoleic acid)濃度為100 μg/mL之標準品儲備液連續進樣五針，以亞麻仁油酸(Linoleic acid)波鋒面積為指標，求出相對標準差。

（八）再現性與穩定性試驗

1. 再現性:取同一家市售蓽澄茄粉末，依蓽澄茄檢品溶液製備方法平行製備五份蓽澄茄檢品溶液，進樣測定，以亞麻仁油酸(Linoleic acid)含量(%)為指標，求出相對標準差。

2. 穩定性:取同一家市售蓽澄茄粉末，依蓽澄茄檢品溶液製備方法製備蓽澄茄檢品溶液，分別在0、2、4、8、16、24小時進樣測定，以亞麻仁油酸(Linoleic acid)鋒面積為指標，求出相對標準差。

（九）同日間與異日間試驗

    取100、250、500 μg/ mL之亞麻仁油酸(Linoleic acid)標準品溶液進行同日間測試(在24小時內每個濃度注射三次)與異日間測試(七天內注射三次，每次間隔24小時以上，每個濃度重複注射三次)，求其相對標準差，以評估HPLC分析條件之穩定性與再現性。

（十）偵測極限與定量極限試驗

    偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≥ 3:1時之濃度，作為偵測極限估計值；定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≥ 10:1時之濃度，作為定量極限估計值。

（十一）添加回收率試驗

    取已知亞麻仁油酸(Linoleic acid)含量的蓽澄茄藥材粉末約0.5 g，精確稱定五份，分別加入3.000 mg的亞麻仁油酸(Linoleic acid)，並按檢品溶液製備方法操作測定。