方法
（一）最佳萃取條件開發
取本品粉末8份，每份準確稱取20 mg，置50 mL離心管中，準確加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、25%甲醇、95%乙醇、75%乙醇、50%乙醇、25%乙醇各40 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 20分鐘，離心5分鐘(約3000 ´ g)，以No.1濾紙過濾，取濾液轉移至50 mL之定量瓶中，加溶媒至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 mm)，即得。每針10 mL注入HPLC，以所測得每克重量之標準品兒茶素與表兒茶素最大峰面積為最佳兒茶萃取溶媒。
（二）最佳萃取次數評估
準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約20 mg，置50 mL 離心管中，準確加入50%甲醇40 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 20分鐘，離心5分鐘(約3000 ´ g)，以No.1濾紙過濾，取濾液轉移至50 mL之定量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syring filter，PTFE 0.45 mm)，即得。每針10 mL注入HPLC，殘渣部分重複上述方法多次萃取、進樣，直到指標成分被萃取完全，並選出最佳萃取次數。
（三）對照標準品溶液
1. 準確稱取標準品兒茶素5.0 mg，加10 mL甲醇製成每1 mL含500 μg的標準品儲備溶液，並以甲醇稀釋至150 μg/mL製成對照標準品溶液。
2. 準確稱取標準品表兒茶素5.0 mg，加10 mL甲醇製成每1 mL含500 μg的標準品儲備溶液，並以甲醇稀釋至100 μg/mL製成對照標準品溶液。
（四）檢品溶液
準確稱取本品粉末(過第20號篩網)約 20 mg，置50 mL離心管中，加入50%甲醇40 mL，超音波振盪處理(功率300 W，頻率40 kHz) 20分鐘，離心5分鐘(約3000 ´ g)，以No.1濾紙過濾，取濾液，轉移至50 mL之定量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻再過濾(Syringe filter, PTFE 0.45 mm)，即得。
（五）測定法
分別準確吸取對照標準品溶液、檢品溶液10 μL，注入HPLC，測定，用標準曲線計算溶液中兒茶素與表兒茶素的含量，即得。
（六）檢量線
1. 準確吸取兒茶素標準品儲備液適量(500 μg/mL)，以甲醇稀釋成含兒茶素分別為500、200、150、100、80、40、10 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2。
2. 準確吸取表兒茶素標準品儲備液適量(500 μg/mL)，以甲醇稀釋成含表兒茶素分別為500、250、100、50、25、10、5.0 μg/mL的標準品溶液。以上溶液各取10 μL分別注入HPLC進行定量分析，利用標準品之波峰面積(y軸)和標準品之濃度(x軸)進行線性回歸，並求得檢量線之方程式y = ax + b與相關係數R2。
（七）精密度試驗
1. 以兒茶素濃度為150 μg/mL之對照標準品溶液連續進樣5針，以兒茶素的波峰面積為指標，求出相對標準差。
2. 以表兒茶素濃度為100 μg/mL之對照標準品溶液連續進樣5針，以表兒茶素的波峰面積為指標，求出相對標準差。
（八）重複性與穩定性試驗
1. 重複性：取同一批市售兒茶粉末，依兒茶檢品溶液製備方法平行製備5份兒茶檢品溶液，進樣測定，以兒茶素與表兒茶素的含量(%)為指標，求出相對標準差。
2. 穩定性：取同一批市售兒茶粉末，依兒茶檢品溶液製備方法製備兒茶檢品溶液，分別在0、2、4、8、24小時進樣測定，以兒茶素與表兒茶素的含量為指標，求出相對標準差。
（九）偵測極限與定量極限試驗
1. 偵測極限(Limit of Detection, LOD)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧3:1時之濃度，作為偵測極限估計值。
2. 定量極限(Limit of Quantitation, LOQ)：將已知濃度之標準品溶液不斷稀釋，並以訊號雜訊比為≧10:1時之濃度，作為定量極限估計值。
（十）添加回收率試驗
1. 取已知兒茶素含量的兒茶粉末5份，每份準確稱取約10 mg，分別加入兒茶素2.3 mg，並按檢品溶液製備方法操作測定。
2. 取已知表兒茶素含量的兒茶粉末5份，每份準確稱取約10 mg，分別加入1 mL的表兒茶素溶液(0.3 mg/mL)，並按檢品溶液製備方法操作測定。 |
